引物稀释，引物稀释步骤

引物稀释是分子生物学实验中常见的一个步骤，它涉及到将高浓度的引物溶液按照一定的比例稀释到适合进行CR扩增的浓度。以下是对引物稀释步骤的详细介绍。

1.引物稀释前的准备

将引物用适当缓冲液（如S）稀释至终浓度。不同类型的细胞对附着和培养的最佳浓度可能不同，因此需要根据实际应用条件进行调整。参考范围一般为Y01311/Y013011-100μg/ml；Y01344L/Y013441-20μg/ml。

混匀稀释后的溶液，然后加入到孔板中，以便后续操作。

2.加热溶解将引物在65°C加热几分钟，这样可以帮助引物完全溶解。加热后，需要在室温下缓慢冷却至完全溶解。这一步骤可以确保引物不会因为高温而变性。

3.解决引物浓度不准确的问题

问题：合成后的引物浓度可能不准确，导致CR扩增效率不稳定。

解决策略：使用分光光度计进行精确定量。通过测量溶液的吸光度，可以计算出准确的引物浓度。

4.引物保存与使用

装有引物的Eendorf管一般保存于-20℃。在临用前，需要将引物稀释到适当的浓度。

由于OligoDNA呈很轻的干膜状附在管壁上，打开管子前请先离心10,000rm，1min，然后再慢慢打开盖子，以防止引物散失。

5.引物稀释步骤

计算所需的引物浓度和体积。例如，如果需要10μM的引物，并且知道1μl的100μM引物含有100ng的DNA，那么需要1μl的10μM引物来提供10ng的DNA。

使用移液器准确移取计算好的体积的引物，然后加入适量的稀释缓冲液。

如果需要进一步稀释，可以重复上述步骤，每次稀释后都要计算和移取准确体积。

6.引物稀释的具体操作

将引物溶液与稀释缓冲液按照一定比例混合，例如1:100或1:1000。

使用移液器准确移取计算好的体积，加入到一个新的容器中。

确保混合均匀，然后储存于-20℃备用。

通过以上步骤，可以有效地对引物进行稀释，确保CR扩增的准确性和效率。引物稀释是分子生物学实验中不可或缺的一个环节，正确掌握引物稀释的技巧对于实验的成功至关重要。